細胞培養操作過(guò)程要使用超凈工作臺

目的：建立一套適用的培養操作規程，進(jìn)行無(wú)污染條件下體外細胞擴大培養。

主體內容：

操作步驟：

1、紫外燈照射超凈工作臺30分鐘（根據實(shí)際情況，可適當延長(cháng)或縮短照射時(shí)間，但時(shí)間長(cháng)一點(diǎn)總比時(shí)間短一點(diǎn)安全。）

2、將培養液、PBS、胰酶放在37℃水浴中溫育（每次用多少，溫育多少，這樣既可節約溫育的時(shí)間，又可延長(cháng)藥品的使用期限。）

3、超凈工作臺照射30分鐘后，關(guān)閉紫外，打開(kāi)照明，打開(kāi)排風(fēng)10分鐘后再次進(jìn)入細胞培養室。（注意：要打開(kāi)排風(fēng)10分鐘后再進(jìn)行操作，這樣才能保證循環(huán)的風(fēng)是無(wú)菌的。同時(shí)還會(huì )避免有菌的風(fēng)直接吹到人的呼吸道中，對人體也有一定的保護作用）

4、戴上口罩及手套（有條件的好戴上帽子，不過(guò)也沒(méi)關(guān)系，我們實(shí)驗室就沒(méi)戴）

5、用70-75%的酒精擦試實(shí)驗物品，然后拿入超凈工作臺中。

6、操作時(shí)注意以下幾點(diǎn)：盡量在酒精燈火焰附近操作，但如果管子里有細胞就要離火焰有一定距離了，否則細胞要燙死了；不要重復使用移液管（即吸一次后，就換新的管）；不要在敞開(kāi)的容器上方操作；手上的酒精不要擦太多，否則靠近酒精燈時(shí)容易把手燒到（我想很多人都有過(guò)被燒的經(jīng)歷吧）；

其實(shí)操作是很簡(jiǎn)單的，但一定要仔細。尤其是第2步許多人都不注意，細胞平時(shí)放在37℃培養，如果加入的PBS或胰酶溫度太低，會(huì )對細胞有操傷的，雖然這種損傷短期內察覺(jué)不到，但時(shí)間長(cháng)了，就會(huì )顯現出來(lái)。