藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗室設計

    藥品檢驗實(shí)驗室通常包含理化實(shí)驗室和微生物實(shí)驗室兩部分；理化實(shí)驗室運用物理、化學(xué)的方法對生產(chǎn)用的原輔料、包裝材料、中間體及成品等進(jìn)行鑒別、含量測定等分析和檢驗，其結果作為檢品是否符合法定要求和企業(yè)內部質(zhì)量標準的依據。

微生物實(shí)驗室一般具有以下功能：

① 按2015《中國藥典》要求，進(jìn)行微生物檢驗方法的驗證、無(wú)菌檢查、微生物限度檢查、***效價(jià)的微生物檢定、青霉素酶及其活力測定。

② 按現行2010《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規范》的要求，對醫藥工業(yè)潔凈室的潔凈度進(jìn)行微生物測定，對無(wú)菌生產(chǎn)區環(huán)境日常動(dòng)態(tài)監測以及生產(chǎn)過(guò)程 中其他需要進(jìn)行微生物檢測的地方，如對無(wú)菌過(guò)濾器的驗證、環(huán)境及設備**效果的驗證、**效果的驗證、無(wú)菌藥品包裝密封性驗證中 微生物挑戰性試驗等。

③ **內**檢查、注射劑的不溶性微粒檢查，這類(lèi)檢查雖不是檢查微生物，但它們對檢查環(huán)境有較高的要求，通常設在微生物實(shí)驗室。

環(huán)境要求                          

微生物實(shí)驗室應按相關(guān)國家標準制定完整的潔凈室（區）和隔離系統的驗證和環(huán)境監測標準操作規程，環(huán)境監測項目和監測頻率及對超標結果的處理應有書(shū)面程序。監測項目應涵蓋到位，包括對空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及物理參數（溫度、相對濕度、換氣次數、氣流速度、壓差、噪聲等）的有效地控制和監測。環(huán)境監測按藥品潔凈實(shí)驗室微生物監測和控制指導原則（通則9205）進(jìn)行。

 2 微生物實(shí)驗室設計的有關(guān)要求        

藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗室設計 2010《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規范》要求藥品生產(chǎn)企業(yè)應負責藥品生產(chǎn)全過(guò)程的質(zhì)量管理和檢驗，并配備與藥品生產(chǎn)規模、品種、檢驗要求相適 應的人員、場(chǎng)所、儀器、設備。在進(jìn)行微生物實(shí)驗室的設計時(shí)，應了解檢驗流程、過(guò)程性質(zhì)、有關(guān)標準規范的規定等，結合藥品生產(chǎn)企業(yè) 生產(chǎn)品種、檢驗工作量的大小合理布置相應的微生物檢驗功能間。

在藥品的微生物學(xué)檢驗中，為了保證檢測結果的準確、可靠，針對微生物學(xué)檢驗產(chǎn)生影響的幾種因素需要采取相應的措施，通常為以下幾 種：

① 藥品本身的抑菌性或藥品中防腐劑的抑菌性。它們會(huì )掩蓋無(wú)菌藥品已受污染的事實(shí)或造成低于實(shí)際污染水平的菌檢結果。通常采用生長(cháng) 比較法，在實(shí)際檢驗條件下，通過(guò)比較對照接種試驗菌或陽(yáng)性菌在有無(wú)供試品的狀態(tài)下的生長(cháng)情況，來(lái)驗證供試品在該檢驗方法下的抑菌 性。

② 標準菌種（試驗菌或陽(yáng)性菌）制備與傳代、種類(lèi)及生長(cháng)狀態(tài)需符合現行《中國藥典》要求。

③ 培養基的促菌生長(cháng)能力：培養基應具備廣譜性，有助于檢品中所有存活微生物的生長(cháng)。通過(guò)接種不同試驗菌并觀(guān)察它們的生長(cháng)狀態(tài)，進(jìn) 行培養基靈敏度驗證試驗。

④ 檢驗器具，如過(guò)濾系統的濾器、濾膜性質(zhì)、 材質(zhì)等性能，淋洗液、稀釋劑、培養基的無(wú)菌性及操作程序等，通常進(jìn)行陰性對照試驗來(lái)檢驗其影響。

⑤ 培養條件（溫度、濕度及需氧或厭氧）及檢測環(huán)境應符合相關(guān)要求。

2.1 無(wú)菌檢查實(shí)驗室          

2.1.1 用途       

用于檢查藥典要求無(wú)菌的藥品、醫療器具、原料、輔料及其他品種是否無(wú)菌。

2.1.2 《中國藥典》對無(wú)菌檢查實(shí)驗室要求

藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗室設計 無(wú)菌檢查應在環(huán)境潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區域內或隔離系統中進(jìn)行，其全過(guò)程必須嚴格遵守無(wú)菌操作，防止 微生物污染。單向流空氣區、工作臺面及環(huán)境應定期按《醫藥工業(yè)潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行國家標準 進(jìn)行潔凈度驗證。隔離系統按相關(guān)的要求進(jìn)行驗證，其內部環(huán)境的潔凈度須符合無(wú)菌檢查的要求。

2.2 微生物限度檢查實(shí)驗室  

2.2.1 用途

用于檢查非規定**制劑及其原料、輔料受微生物污染的程度。檢查項目包括**數、霉菌數、酵母菌數及控制菌檢查。

 2.2.2《中國藥典》

對微生物限度檢查實(shí)驗室的要求

微生物限度檢查應在環(huán)境潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區域內進(jìn)行。檢驗全過(guò)程必須嚴格遵守無(wú)菌操作，防止再污染。單向流空氣區域、工作臺面及環(huán)境應定期按《醫藥工業(yè)潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行國家標準進(jìn)行潔凈度驗證。

 微生物實(shí)驗的各項工作應在專(zhuān)屬的區域進(jìn)行，以降低交叉污染、假陽(yáng)性結果和假陰性結果出現的風(fēng)險。無(wú)菌檢查應在B級背景下的*單向流潔凈區域或隔離系統中進(jìn)行，微生物限度檢查應在不低于D級背景下的B級單向流空氣區域內進(jìn)行。*和B級區域的空氣供給應通過(guò)終端高效空氣過(guò)濾器（HEPA）。

2.3 ***效價(jià)的微生物檢定室    

2.3.1 用途

在適宜條件下，根據量反應平行線(xiàn)原理設計，通過(guò)檢測***對微生物的抑制作用，計算***活性（效價(jià)）2.3.2 《中國藥典》[1]對***效價(jià)的微生物檢定室的環(huán)境潔凈度未有明確規定要求 在國家食品藥品監督管理局2000年9月頒發(fā)的《藥品檢驗所實(shí)驗室質(zhì)量管理規范（試行）》中第十八條中規定有“***微生物檢定實(shí)驗室分為半無(wú)菌操作間和緩沖間。半無(wú)菌操作間設有紫外線(xiàn)燈，操作臺宜穩固，并保持水平。實(shí)驗室內應光線(xiàn)明亮，并有控制溫度、濕度的設備”。通常按潔凈度100 000級設計。

***效價(jià)的微生物檢定實(shí)驗所用燒杯、漏斗、移液管、容量瓶、滴管、小鋼管等器皿應與其他器皿分開(kāi)洗滌，檢定用平板與其他培 養基平板也應分開(kāi)洗滌，防止***對其他微生物培養的污染。

2.4 **內**檢查用室

2.4.1 用途

利用鱟試劑來(lái)檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的**內**，以判斷供試品中**內**的*是否符合規定。適用于某些不能用家兔進(jìn)行 熱原檢測的品種，如放射**劑腫瘤抑制劑等，因為這些制劑具有細胞毒性而有一定的生物效應。目前一般認為特別適用于生產(chǎn)過(guò)程中的 熱原控制，因為該檢查法操作簡(jiǎn)單，實(shí)驗費用少，結果迅速可得。但該檢查法對革蘭陰性菌以外的內**不夠敏感，故尚不能代替家兔熱 原法。

2.4.2 《中國藥典》中要求 進(jìn)行**內**含量測定試驗所用的器皿需經(jīng)處理，以去除可能存在的外源性?xún)?*，試驗操作過(guò)程應防止微生物的污染，在清凈環(huán)境中進(jìn)行，在層流工作臺內操作。實(shí)驗前，須用肥皂洗手，用75%乙醇（*好用叔丁醇代替乙醇）棉球**。但《中國藥典》中未對**內毒素檢查用室的環(huán)境潔凈度明確規定要求。一般來(lái)說(shuō)**內**檢查用室為半無(wú)菌操作間：室內設**紫外燈，潔凈度要求一般為100 000 級。也有一些藥廠(chǎng)為了節省能耗而將其設置為一般環(huán)境。

2.5 不溶性微粒檢查用室   

2.5.1 用途

在可見(jiàn)異物檢查符合規定后，用以檢查溶液型靜脈用注射劑中不溶性微粒的大小和數量。

2.5.2 《中國藥典》[1]要求試驗操作環(huán)境應不得引入微粒，測定前的操作應在層流凈化臺下進(jìn)行。玻璃儀器和其他所需的用品應潔凈無(wú)微粒，本法所用微粒檢查用水（或溶劑）使用前須經(jīng)不大于1.0 um的微孔濾膜濾過(guò)。

2.5.3 因《中國藥典》要求注射用水須進(jìn)行**內**檢測，因此溶液型靜脈用注射劑的不溶性微粒檢查可與**內**檢查用室設成一 間，不用專(zhuān)設一室，配置相應的層流凈化臺。

3 有關(guān)問(wèn)題及案例

3.1 陽(yáng)性接種室      

（1）微生物檢驗離不開(kāi)對標準菌種及所檢測的菌種進(jìn)行各種處理，如培養基的靈敏度檢查、無(wú)菌檢查及微生物限度檢查方法的驗證、陽(yáng) 性對照、***效價(jià)的微生物檢定時(shí)菌種及菌懸液制備、轉接種等，這些活動(dòng)要直接處理微生物菌種，在一定條件下，許多種類(lèi)都是病原菌，因此有關(guān)微生物暴露性操作活動(dòng)盡可能在生物安全柜內進(jìn)行。所有染菌物品、培養物均應經(jīng)高壓**處理后再清洗。

（2）無(wú)菌檢查及微生物限度檢查中陽(yáng)性對照菌液加入含供試品的培養基的操作，不能在檢測供試品的無(wú)菌室或凈化臺上進(jìn)行，以免污染 供試品及操作環(huán)境?？稍O置一間陽(yáng)性接種室進(jìn)行上述操作。以前有的將其設置為一般環(huán)境；有的根本就未專(zhuān)設此室。

3.2 無(wú)菌室    

《中國藥典》要求無(wú)菌藥品的無(wú)菌性檢查室、非無(wú)菌藥品的微生物限度檢查室的環(huán)境潔凈度都為10 000級（局部潔凈度100級），通常都 稱(chēng)為無(wú)菌室；若某藥廠(chǎng)既生產(chǎn)無(wú)菌藥品，也生產(chǎn)非無(wú)菌藥品，為防止非無(wú)菌藥品供試品對無(wú)菌藥品的無(wú)菌性檢查的污染，有兩種方式：

① 如果同時(shí)進(jìn)行這兩類(lèi)藥品的檢驗，*好將這兩種無(wú)菌室分開(kāi)設置二套，使用各自的人凈、物凈系統。此種方式無(wú)菌室利用率不高。

② 通常只設一套無(wú)菌室，分期進(jìn)行這兩類(lèi)藥品的檢驗，合理安排檢驗規程、嚴格操作并經(jīng)驗證，確保不對無(wú)菌藥品的無(wú)菌性檢查產(chǎn)生污 染。

3.3 隔離系統

2015《中國藥典》無(wú)菌檢查法中被為可使用的設施，它能提供并保持與外界環(huán)境隔離的百級潔凈度的操作環(huán)境。隔離操作器所處環(huán)境的 級別取決于它們的設計及其應用。美國藥典并不要求它安裝在潔凈區/室，但應控制無(wú)關(guān)人員進(jìn)入其所處房間；歐盟GMP則建議應將它放 置于100 000級的環(huán)境中。

采用隔離操作技術(shù)能*大限度降低操作人員和外界環(huán)境對潔凈空間的影響。它既可用于無(wú)菌實(shí)驗，又可用于其他需要高潔凈度的多種研究 和實(shí)驗。

但隔離操作器的性能與操作程序的驗證尤為重要，隔離用袖管/手套系統應進(jìn)行常規監測，這包括經(jīng)常進(jìn)行必要的檢漏試驗。隔離系統的 諸多優(yōu)勢如潔凈區域的隔離化、自動(dòng)化、小型化等將使其成為無(wú)菌區的發(fā)展未來(lái)。

3.4培養室      

用來(lái)放置培養各類(lèi)微生物生長(cháng)的**培養箱和**培養箱。大多數將其設置為一般環(huán)境；也有的將其潔凈度設置為100 000級。設計時(shí)根據藥廠(chǎng)相關(guān)部門(mén)的要求進(jìn)行。

3.5 案例圖1中無(wú)菌檢查采用環(huán)境潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級；

藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗室設計圖2中無(wú)菌檢查采用環(huán)境潔凈度100 000級下的無(wú)菌隔離系統，對目前需要改造而面積及空調系統受原有條件限制的微生物實(shí)驗室來(lái)說(shuō)較為適用。微生物實(shí)驗室的其他輔助設施在設計時(shí)與理化實(shí)驗室一起統籌考慮。

藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗室設計《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規范》要求藥品生產(chǎn)企業(yè)生物檢定、微生物和放射性同位素的實(shí)驗室應當分時(shí)進(jìn)行。避免實(shí)驗間的交叉污染，以不影響數據的測定。無(wú)菌檢查、微生物室和陽(yáng)性對照室分開(kāi)固然能解決不同實(shí)驗的交叉污染問(wèn)題，若與無(wú)菌室等共用凈化空調系統，一旦因操作失誤或其他原因造成環(huán)境污染，則所有同一空調系統下的實(shí)驗室都將被污染，所以其必須是獨立的空調系統。陽(yáng)性對照室且回風(fēng)應直排，微生物檢查室建議且回風(fēng)應直排，只有無(wú)菌檢查室可以利用回風(fēng)，這樣才能保證整個(gè)環(huán)境不產(chǎn)生交叉污染。